HPLC外标法含量计算有哪些注意事项?
时间:2023-06-16 15:19:26来源:弗戈工业在线


(相关资料图)

在这篇文章中,帮大家整理了如下两点: HPLC法应用于含量测定时哪些需要注意的问题? 外标法含量计算方式有哪些注意事项是必知的? HPLC法应用于含量测定时需要注意的问题 在建立一个新的HPLC法含量测定方法时,方法建立以及方法学验证方案需要特别考虑下述多种因素对分析结果的影响。 1、流动相缓冲盐的pH值流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响,甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为。见下图1,当流动相中缓冲溶液的pH为3.0时,出峰顺序为利多卡因、苯甲酰胺、酮洛芬,当流动相中缓冲溶液的pH为10.0时,三种药物的出峰顺序为酮洛芬、苯甲酰胺、利多卡因二即使是梯度洗脱,流动相中缓冲溶液的pH值仍然对药物的保留行为产生影响。2、色谱柱色谱柱的差异也会影响药物的保留行为,即使是柱长、内径、粒径相同的色谱柱,由于填料性质的差异,药物的保留时间、峰型有时会有较大差异。 3、流动相组成以多元维生素制剂的含量测定为例,某制剂中含有4种维生素:烟酰胺、维生素B6、维生素B2和维生素B1。如图2所示,当流动相中己烷磺酸钠和庚烷磺酸钠的相对比例由1:1变为4:6时,不仅各组分的保留时间、峰形有变化,甚至峰3、峰4没有实现分离。含量的计算方式以及注意事项 HPLC的定量方法可以分为内标法和外标法。在仪器发展的初期,由于进样重复性差。为了保证测定结果的准确采用内标法较多。随着自动进样装置的发展,进样的重复性已经足够精密,从90年代开始,大部分的内标法已经被外标法取代。但是,在药典制剂品种中还有一定数量的HPLC含量测定方法采用内标法。 除了尚未修订以外,以前担心的进样重复性已经不是采用内标法的原因,主要是因为药品制剂含量测定中样品回收率或样品制备方法的回收率影响,供试品溶液在萃取、离心处理或其他样品溶液制备过程中不能保证样品的完全提取,以及辅料对低含量药物的吸附作用,采用内标法可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。 外标法含量计算方式注意事项外标法含量计算公式: 含量=m对*P*A样*V样/(m样*A对*V对)*100% 1、样品称样量 a、称量方式采用的是加量法还是减量法,都是很有讲究的。正常情况下,肯定要采用加量法,一次称取到位,这样才能得到准确的称样量。 b、称量操作称量时,是否足够小心,不会在转移样品时使样品撒漏,这个是非常重要的。 c、样品如果具有挥发性,直接称样时,必然会挥发一部分造成误差; 另外,如果样品不稳定,或在溶液中不稳定,那么实际上来讲,也是影响了样品量。 还有,样品要保证均匀,固体不必说,液体样品要保证是均相,称量之前要摇匀。 2、对照品含量 a、对照品质量对照品是否有合法来源,其含量值是否准确。 b、对照品的保存对照品是否按要求保存,也是至关重要的。 因为如果对照品没有按照规定保存,那么其右可能会发生降解,进而影响含量值; 另外,如果对照品是保存在冰箱中,称量时,应取出放在干燥器中回至室温再称量,否则其很有可能会吸收空气中的水分,影响含量值。 同理,如果对照品引湿性很强的话,长期暴露在空气中,也会使其P发生变化。 3、样品峰面积 a、如果所用的分析方法可靠性不好,样品峰面积或保留时间容易变化,那么检测结果也是很重现性不好的。 b、如果仪器系统被污染产生残留,而本身峰面积就不大的情况下,这个因素产生的误差就更明显了。 c、如果样品峰形不够好,或者分离度不够好的情况下,积分就很重要。 4、样品的稀释体积 a、容量瓶、移液管等体积是否准确。一般来说,新买的容量瓶体积是符合要求的,但是也难免会买到个别次品,这就需要进行校验了。 b、容量瓶、移液管规格。这个是很重要的,一般大家都能注意这个问题,做到合理使用。 c、试验习惯问题,容量瓶在使用时,不能使其至于高于40摄氏度的环境下,否则容量瓶会发生变形。 d、定量操作,这个包括容量瓶和移液管的使用,注意事项: 一是移液管吸液时,液面不要高刻度太多,放液时千万不要用洗耳球吹,并且尽量保持每次操作时间都一样,粘度大的溶液尤其需要如此。 二是观察液面时,要使容量瓶和移液管保持垂直,这时很多人喜欢用三根手指捏住,其实这样不容易保持垂直,最好用两根手指,轻轻捏住就好。 三是注意接触容量瓶移液管等的面积越小越好,以免体温加热溶液。 e、如果对照品和样品没有用同一份稀释剂稀释的话,两者就会有差异,受到温度变化的影响也是不一样的。比如,所用的稀释剂为水:甲醇=50:50,对照溶液用的是上次配好的,然后样品用的是新配的,因为水和甲醇混合会放热,其体积也会增大,等到进样时,样品溶液回至室温,体积减小,就会造成检测结果偏高。 f、如果前后室温变化的话,也会造成分析结果的误差。比如,对照溶液进样时,是正常上班时间,实验室开了空调,温度为20℃,而到样品溶液进样时,已经到下班时间了,实验室人员下班时将空调关闭,实验室温度已经降为10℃,这时样品溶液浓度肯定也会增大。 g、由于对照品相对比较贵重,一般实验室都会保存一段时间。如果下次分析时没有回至室温,或此时室温与对照品溶液配制时的温度已经发生了明显的变化,都会造成分析结果的误差。 h、有些人配好样品后,喜欢用手去握着容量瓶,细心观察的就会发现一会之后液面就明显高于刻度。如果操作者没有注意这点,有的样品立即进样,有的排队过了一会再进样,就会造成误差。

标签:

生活指南
  • 每日视讯:公开盘点:武汉泌尿疾病的治疗医院 男性健康直击:武汉男科医院泌尿科怎么样

      公开盘点:武汉泌尿疾病的治疗医院男性健康直击:武汉男科医院泌尿

  • 余额宝买了天弘基金怎么把他退回来(我无意中在余额宝中卖了天弘基金能取消吗 怎一样取消)-报道

    1、假如是无意点击开通“余额宝”转入那么随时随地可以“转入 转出”要

  • 喊出“老公气我,喝!”的五个女博士被罚、道歉

    6月14日,此前广告被质疑侮辱女性的“五个女博士”被行政处罚,随后连

  • ​罗山:“罗才之家”揭牌暨招才引智集中签约仪式举行|每日简讯

    近日,河南省信阳市罗山县“罗才之家”揭牌暨招才引智集中签约仪式举行

  • 全球即时:打新债开通条件?打新债和打新股哪个风险大?

    打新债开通条件?打新债(即可转债)不需要特别的条件,只要开通了证券

  • 定金与订金哪个能退?交了定金没签合同能退吗?一文解析!-世界速看料

    定金与订金哪个能退?定金不能退,订金可以退。定金是指双方为了保

  • 今日热文:双肾回声增强一定是有问题吗?双肾回声增强是什么意思?

    双侧肾脏在B超上显示回声增强,说明肾脏有问题,具体是什么问题,需

  • 冰雪皇后可以加盟吗?冰雪皇后加盟商圈特点 热文

    冰雪皇后奶茶店里有奶茶、咖啡、鲜榨果汁、奶昔、冰淇淋等多种多样

  • 环球百事通!冬天汽车开暖风到底费不费油?如何上马路牙子伤害最小?

    冬天开暖风到底费不费油?这个问题是很多车主比较关心的,其实车内的

  • 封闭式理财会不会亏很惨?基金和理财有什么区别?

    封闭式理财会不会亏很惨?会。封闭式净值型理财产品是有可能亏损的。

  • 股权转让如何缴纳印花税?亏损企业股权转让要交什么税?

    股权转让如何缴纳印花税?股权出让方和受让方都要按照协议价格(所载

  • 焦点报道:信用卡逾期一月利息是多少?信用卡逾期三个月如何补救?

    1、逾期在一个月内,算逾期一次,只要逾期,哪怕一次,想提升额度就

  • 什么情况下会被自然人股东?自然人股东死亡其继承人如何继承股权?

    什么情况下会被自然人股东?自然人股东的意思是具有公民身份的个人

  • 微信不显示信息条数怎么操作?添加微信时候打招呼内容设置-看热讯

    微信不显示信息条数怎么操作?1、进入手机设置,点击通知。2、向上滑

  • 【全球热闻】什么是货物质押融资链? 货物质押融资链的内容包括什么?

    什么是货物质押融资链?货物质押融资链是指企业以自己合法拥有的货物

  • 焦点热讯:基金下跌在什么情况下需要补仓?基金定投和一次性买入有什么不一样?

    基金下跌多少可以补仓分三种情况来进行讨论。1 追高买入对于新手投

  • 民生
    • 2023广东江门市交通运输局公务员拟录用公示(6人)

    • 秀组词 天天新资讯

    • 1799元的RX6650XT显卡值得入手吗?你知道具体参数吗?-今热点

    • 软科排名和校友会排名哪一个准确?软科排名可信度高吗?_观点